食管癌死亡率居恶性肿瘤死亡的第六位，全球每年大约有460 000例的新增病例。我国食管癌病例总数居世界首位，且与欧美国家不同，食管鳞癌占绝大多数^{[1, 2]}。食管癌预后很差，总的5年生存率仅为10%~13%^[3]。上皮细胞黏附分子（epithelial cellular adhesion molecule，Ep-CAM）在绝大部分的上皮来源的肿瘤组织中都有表达。其表达强度可以作为一些上皮来源肿瘤预后及分化程度的标志^{[4, 5]}。本研究拟检测Ep-CAM在手术切除的食管鳞癌标本中的表达规律，并探讨其与食管鳞癌发生、发展的关系。

选用首都医科大学附属北京友谊医院胸外科2005—2010年间手术切除的食管鳞癌标本140例。患者年龄38~75岁，平均61.5 岁。所有病例均有完整的临床病理资料，见表 1。按UICC 2009年食管癌分期标准进行分期。食管正常组织标本20例取自食管鳞癌手术切除标本距肿瘤边缘3 cm以上的切缘。

表 1 140例食管鳞癌组织中Ep-CAM蛋白的表达水平与临床病理参数的关系 Table 1 Correlation of Ep-CAM protein expression and clinicopathological data in 140 cases of ESCC

表选项

一抗兔抗人Ep-CAM单克隆抗体（工作浓度 1∶100），PV-9000试剂盒，DAB显色液试剂盒和部分DAB试剂购自北京中杉生物制品公司。

术后所有组织均经10%福尔马林固定，常规石蜡包埋。4 μm连续切片3张，分别行HE和免疫组织化学染色。采用PV-9000二步法免疫组织化学检测。

63℃烤箱烤片1 h。脱蜡二甲苯（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）3×15 min，无水乙醇Ⅰ，无水乙醇Ⅱ，95%酒精Ⅰ，95%酒精Ⅱ，各2 min。蒸馏水水洗，至3%过氧化氢10 min（阻断内源性过氧化物酶）。蒸馏水水洗，抗原修复，乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA）（pH=9）。高压锅修复，喷气后2 min。自然冷却，TBS液（pH7.4）冲洗3次，每次3 min。滴加一抗，90 min。TBS冲洗3次，每次3 min。滴加试剂1，20 min。TBS冲洗3次，每次3 min。滴加试剂2，30 min。TBS冲洗3次，每次3 min。DAB液显色4 min，显微镜下观察控制显色时间。苏木精对比染色，淡染细胞核60 s。脱水，透明，封片。

显微镜下随机观察5个高倍镜视野。按细胞着色程度分为：不着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，褐色为3分。按染色肿瘤细胞所占比例分为：≤10%为0分，10%~30%为1分，>30%~60%为2分，>60%为3分。两项计分之和≥3分为免疫组织化学阳性。

采用SPSS13.0软件对数据进行统计分析。Ep-CAM的表达与临床病理变量之间的关系采用χ²检验及Fisher精确检验分析。采用Kaplan-Meier法进行生存分析。P < 0.05为差异有统计学意义。

免疫组织化学结果显示，在140例ESCC患者中，Ep-CAM阴性55例，阳性表达85例，阳性率为60.7%。Ep-CAM阳性着色主要定位在肿瘤细胞的细胞质。癌旁正常组织中不表达。Ep-CAM阴性见图 1，Ep-CAM阳性见图 2。

图 1 食管鳞癌组织中Ep-CAM蛋白阴性表达 （免疫组织化学 ×400） Figure 1 Negative expression of Ep-CAM protein in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) tissues (IHC × 400)

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A: low expression(IHC ×200); B: moderate expression(IHC ×200); C: high expression(IHC ×400) 图 2 食管鳞癌组织中Ep-CAM蛋白阳性表达 Figure 2 Positive expression of Ep-CAM in ESCC tissues

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食管鳞癌组织中Ep-CAM蛋白表达与患者临床病理特征关系见表 1。Ep-CAM蛋白阳性表达率与患者性别无关（P=0.142）；与肿瘤的长度、分化程度、TNM分期、肿瘤浸润深度和有无淋巴结转移均相关（P < 0.05）。

Ep-CAM是一种Ⅰ型跨膜糖蛋白，属Ca²⁺非依赖性黏附分子，该蛋白及其相关家族的蛋白几乎仅存在于上皮组织中，在非增生的鳞状上皮中表达非常低，通过免疫组织化学的方法通常检测不到^[6]。Ep-CAM在多种恶性肿瘤，如鳞状细胞癌（除皮肤癌之外）、乳腺癌、膀胱癌等多种肿瘤中过表达^{[7, 8]}。而且Ep-CAM阳性细胞无论从数量还是阳性程度上都与肿瘤发展程度密切相关^[9]。甚至有研究认为在绝大部分的上皮来源的肿瘤组织中都有Ep-CAM的表达，其中胃和结直肠消化道肿瘤、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、肺癌、前列腺癌等的Ep-CAM阳性率都达到或接近100%^[10]。本研究中，Ep-CAM在60.7%的食管鳞癌中过表达，在癌旁正常食管黏膜中不表达，提示Ep-CAM可以作为食管鳞癌的标志物。

研究表明，Ep-CAM可以通过钙黏蛋白（E-cadherin）调节细胞间的黏附作用，从而参与肿瘤的浸润和迁徙过程。在实验中，通过转染诱导Ep-CAM cDNA的合成来增加钙黏蛋白阳性细胞中Ep-CAM的表达，可以在不减少细胞钙黏蛋白总量的情况下降低黏附作用^[11]。既往的临床研究中，Ep-CAM与肿瘤进展和预后的关系并不明确。在很多肿瘤中，Ep-CAM过表达是预后不良的指标^{[12, 13]} 。如在舌鳞癌和肺鳞癌中，Ep-CAM过表达与淋巴结转移相关^{[14, 15]}，而在另外一些肿瘤中，Ep-CAM表现出相反的作用。如在正常胃黏膜中Ep-CAM低表达，在肠上皮化生的黏膜中表达增高，而Ep-CAM表达缺失是胃癌预后不佳的指标^[16]。在肾癌中，Ep-CAM表达缺失与肿瘤的大小和转移正相关，Ep-CAM过表达是预后好的独立预测因子^[17]。这些研究表明Ep-CAM蛋白在不同的肿瘤中的作用复杂，可能受到不同的上游分子通路的调节。在本研究中，Ep-CAM高表达率与肿瘤长度、浸润深度和淋巴结转移呈正相关，而且与临床TNM分期相关。表明Ep-CAM高表达是食管鳞癌浸润和转移的标志物，并可能是预后不良的指标。另外，在结肠癌靶向治疗的研究中，以Ep-CAM为靶点的IgG1抗体在术后辅助治疗中减少了复发、改善了预后^[18]。提示Ep-CAM有可能成为食管鳞癌治疗的靶点。