低度恶性肌纤维母细胞肉瘤（low-grade myofibroblastic sarcoma,LGMS）是临床上一种非常少见 的恶性梭形细胞肿瘤，起源于间叶组织，主要由分 化程度不同的肌纤维母细胞组成^[1]，好发四肢及头颈 部。目前LGMS的病因和发病机制仍不十分明了。 富含亮氨酸的核苷酸结合域受体家族的模式

识别受体（nucleotide-binding domain leucine-rich repeat-containing,NLR）主要参与先天性免疫系统 形成的炎症^[2]，NLRP3（NLR protein 3）是NLRs家 族中的重要成员，其与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶前 体（pro-caspase-1）和含有CARD羧基末端的细胞 凋亡相关斑点蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing a carboxy-terminal CARD,ASC） 共同组成NLRP3炎性复合体。其不仅在髓系细胞中 表达，而且在非髓系细胞中也存在NLRP3炎性体， 且参与多种疾病发生发展过程^{[3, 4]}。例如其在肝细 胞中表达且参与肝癌的发展进程^[5]，然而NLRP3炎 性体在LGMS中的表达及作用尚未见报道。

本研究预收集LGMS瘤组织和瘤旁组织，检测 NLRP3炎性体3个蛋白的表达水平，及与肌纤维母 细胞肉瘤发生、发展的关系，为其发病机制研究 奠定基础，为LGMS的预防和治疗提供线索。

收集2011年9月至2014年9月郑州大学附属肿 瘤医院骨与软组织肿瘤科13例软组织LGMS手术 切除标本，瘤组织经病理学确诊，瘤旁组织为距 离瘤组织5 cm以上组织。其中男8例，女5例；年 龄14~68岁，肿瘤原发部位：四肢11例，头颈部 2例；原发4例，复发9例。所有病例术前均无化 疗、放疗和免疫治疗史。所有患者术后均进行定 期随访，2年内每3月复诊一次，第3年每6月复诊 一次，随访率为100%。本研究已获得郑州大学附 属肿瘤医院伦理委员会批准。

采用免疫组织化学SP法，兔抗人Caspase-1和 NLRP3多克隆抗体购于武汉博士德生物工程有限 公司、羊抗人ASC多克隆抗体购于Santa Cruz公 司，SP免疫组织化学试剂盒和DAB显色剂均购于 北京中杉金桥生物技术开发公司。

染色Caspase-1、ASC和NLRP3一抗均按1:100 稀释，用PBS代替一抗作为空白对照，DAB显 色，程序严格按试剂盒说明书进行，苏木精对比染色，脱水，透明，封片。应用江苏捷达科技公 司图像采集分析系统，在高倍显微镜下（×200和× 400）每张切片选取阳性细胞集中的10个视野采集 图像，之后采用Image-Pro Plus 6.0图像分析软件， 测量每个视野下阳性表达区域的累积吸光度，并 求出每张切片的平均吸光度值。

采用SPSS15.0统计软件包进行数据处理，平 均吸光度值采用均数±标准差表示，两组间均数 比较采用t检验，3个指标间两两相关采用Pearson 相关分析，检验水准为双侧α=0.05。

NLRP3炎性体中Caspase-1、ASC和NLRP3蛋 白均主要表达在细胞质中，染色呈棕黄色，瘤旁 组织中Caspase-1、ASC和NLRP3蛋白表达水平均 明显高于低度恶性肌纤维母细胞瘤组织，差异有 统计学意义（P<0.05），见图 1、表 1。

A: ×200; B: ×400; ASC: apoptosis-associated speck-like protein containing a carboxy-terminal CARD; NLRP3: nucleotide-binding domain leucinerichrepeat-containing protein 3 图 1 低度恶性肌纤维母细胞肉瘤组织和瘤旁组织中NLRP3炎性体Caspase-1、ASC和NLRP3蛋白的表达 Figure 1 Expression of three NLRP3 inflammasome proteins in LGMS and adjacent cancer tissues detected by immunohistochemistry

图选项

表 1 低度恶性肌纤维母细胞肉瘤组织和瘤旁组织NLRP3 炎性体Caspase-1、ASC、NLRP3蛋白的表达水平 Table 1 Average optical density(AOD) of Caspase-1, ASC and NLRP3 proteins in LGMS and adjacent cancer tissues

表选项

LGMS转移患者和复发患者瘤组织中Caspase-1、 ASC和NLRP3蛋白表达明显低于未发生转移患者和 原发肿瘤患者（P<0.05）；而与年龄、性别和原发部 位是否有慢性炎性反应无关（P>0.05），见表 2。

表 2 低度恶性肌纤维母细胞肉瘤组织NLRP3炎性体Caspase-1、ASC和NLRP3蛋白的表达与患者临床病理特征的关系 Table 2 Relationship between three NLRP3 inflammasome proteins expression in LGMS tissues and clinical characteristics of LGMS patients

表选项

两组中Caspase-1、ASC和NLRP3蛋白表达水 平两两之间均呈明显正相关：Caspase-1与ASC 表达呈正相关（r=0.762,P=0.028）; Caspase-1与 NLRP3表达呈正相关（r=0.805,P=0.019）; ASC与 NLRP3表达呈正相关（r=0.784,P=0.026）。

肌纤维母细胞最早于1971年被Gabbiani在肉芽 组织中发现，其在超微结构和部分功能上同时具有 纤维母细胞和平滑肌的部分特点^[6]。起源于肌纤维母 细胞的良性肿瘤有炎性肌纤维母细胞瘤（inflammatory myofibroblastic tumor,IMT）和肌纤维瘤（myofibroma）， 而低度恶性肌纤维母细胞肉瘤（low-grade myofibroblastic sarcoma，LGMS）是来源于肌纤维母 细胞的一种恶性肿瘤，在新的WHO软组织肿瘤分类 中被列为独立的疾病类型^[7]。LGMS发病率很低，主 要发生于成人，男性略多于女性，发病部位多见于四 肢和头颈。LGMS能转移至脑^[8]、肺和心脏^[9]等部位。

有文献报道^[10]该病的发生可能与炎性反应、感 染或自身免疫功能异常等因素有关，通过异常病 灶愈合或在炎性细胞因子的作用下促使成纤维细 胞增殖和胶原异常修复而形成肿瘤。

介导炎性反应发生的有细胞膜受体和细胞质 受体，NOD样受体（NOD like receptor,NLR）是一类存在于细胞质的受体，NLRP3是其中之一。 NLRP3炎性体是由NLRP3、ASC和Pro-caspase-1组 成的蛋白复合体，当其被细胞质中的一些危险信号 激活后，Pro-caspase-1被裂解为成熟的Caspase-1， 而成熟的具有活性的Caspase-1能进一步裂解IL-1β 和IL-18的前体（pro-IL-1β和pro-IL-18）为成熟体并 分泌至细胞外，发挥其促炎作用^[11]。此外，决定细 胞的命运是NLRP3炎性体的另一个功能，即激活的 NLRP3炎性体能够促进细胞死亡^[12]。

NLRP3炎性体与炎性疾病发生关系密切。例如 NLRP3炎性体促进动物过敏性哮喘的发生和气道 炎性因子的分泌^{[13, 14]}；并能够促进小鼠诱导性肠炎 的发生^[15]。近年来专家们开始着力于研究NLRP3炎 性体与肿瘤的关系，研究显示肝癌瘤旁组织中炎性 体Caspase-1、ASC和NLRP3三个蛋白的表达水平 均明显高于肝癌组织^[5]，与本研究的结果一致。

本研究显示LGMS转移患者和复发患者瘤组织 中Caspase-1、ASC和NLRP3蛋白表达明显低于未 发生转移患者和原发肿瘤患者，即LGMS瘤组织中 炎性体相关蛋白表达水平高时，LGMS不容易发 生转移，且手术切除后不易复发，表明NLRP3炎 性体能够抑制LGMS的转移，并影响其预后。有 类似的文献支持本研究的结果，例如NLRP3能够 抑制自然杀伤细胞介导的肺癌转移^[16]，且研究^[5]显 示随着肝癌病理分期的升高，Caspase-1、ASC和 NLRP3蛋白表达水平均明显降低，提示该炎性体 对肝癌的进展具有一定的保护作用。

LGMS可能在炎性反应的作用下成纤维细胞出 现异常，释放损伤相关分子信号，从而进一步促进 炎性反应发展和细胞损伤。成纤维细胞损伤后会 反馈性的进行补偿性细胞再生，而异常的细胞再 生可能会增加LGMS的发生风险；而NLRP3炎性体 作为一种细胞质内的危险信号识别受体，其表达减 少可能会忽视细胞质中的危险信号而错误地允许 异常细胞存活^[5]，最终导致肿瘤的发生。这可能是 NLRP3炎性体对LGMS发展发挥保护作用的原因。

但也有报道显示NLRP3炎性体能够促进黑色 素瘤的生长和转移^[17]，并能促进胃癌的侵袭^[18]。 这可能和NLRP3炎性体激活后释放入肿瘤微环境 中较多的细胞因子（IL-1β和IL-18）有关^[19]。因此 NLRP3炎性体在肿瘤，特别是LGMS转移和预后的 作用仍需进一步深入探讨。

本研究还发现NLRP3炎性体3个蛋白表达水平 两两之间呈明显正相关，这可能是因为只有这3个蛋 白结合在一起形成复合物才能被激活而发挥作用。

本研究首次报道NLRP3炎性体3个蛋白在 LGMS中的表达及与临床指标间的关系，为LGMS 的发病机制、预防和治疗提供一定的理论基础。