2015, Vol. 42文章信息
- 展鹏远，王晓磊，郭伟，段文飞，邢燕来，吴飞.
- ZHAN Pengyuan, WANG Xiaolei, GUO Wei, DUAN Wenfei, XING Yanlai, WU Fei.
- 共刺激因子B7-H1蛋白在胆囊癌中的表达及与预后的关系
- Expression of Costimulator B7-H1 Protein in Gallbladder Carcinoma Tissues and Its Relationship with Prognosis
- 肿瘤防治研究, 2015, 42(11): 1128-1130
- Cancer Res Prev Treat, 2015, 42(11): 1128-1130
- http://www.zlfzyj.com/CN/10.3971/j.issn.1000-8578.2015.11.015
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文章历史
- 收稿日期: 2014-12-05
- 修回日期: 2015-06-11
引用本文 |
胆囊癌的恶性程度高，预后差。研究胆囊癌发生发展的相关因子，对于揭示其本质，探索新的抗肿瘤途径具有十分重要的意义。现有的研究表明[1]，多种基因相互作用及其调控蛋白的差异表达在恶性肿瘤发生、发展及侵袭转移中起作用；其中就包括B7-H1。本研究应用免疫组织化学SP法检测B7-H1蛋白在60例胆囊癌组织中的表达；探讨B7-H1蛋白在胆囊癌组织中的表达规律及其可能预示的临床意义。
1 资料与方法 1.1 临床资料收集河南大学第一附属医院2004年6月至2011年1月期间手术切除的胆囊癌标本60例，所有的患者术前均未接受放、化疗，术后病理诊断为胆囊癌。所取标本均经10%甲醛固定，石蜡包埋。其中男15例、女45例；年龄＞50岁40例、≤50岁20例；TNMⅠ期12例、Ⅱ期38例、Ⅲ期8例、Ⅳ期2例；伴淋巴结转移者26例、无淋巴结转移者34例；高分化10例、中分化32例、低分化18例。对所有患者进行电话或书信随访，全部患者生存时间以确诊时间为起点， 至患者死亡或最近一次随访时间生存为终点，无失访患者；随访时间截止至2014年1月31日。取癌旁非肿瘤组织20例及胆囊腺瘤性息肉20例作为对照。
1.2 主要试剂人B7-H1别藻蓝蛋白单克隆抗体（克隆185504），鼠IgG1单克隆抗体均购自美国R&D公司。超敏SP（通用型）试剂盒：生物素标记的羊抗鼠IgG、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶购自福州迈新生物技术开发有限公司，产品编号：KIT-9701。
1.3 方法 1.3.1 免疫组织化学检测采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法（SP法）；所用的载玻片用10%稀硝酸及AEPS液处理；一抗为B7-H1（1:100稀释）；二抗为生物素化IgG；操作步骤按说明书进行；以结肠癌作为阳性对照，以磷酸盐缓冲盐水（PBS液）代替一抗作阴性空白对照。
1.3.2 结果判定方法以细胞质及细胞膜中出现棕黄色颗粒状物为阳性染色，在高倍镜下（×400），随机观察4个不连续视野，计算阳性细胞占细胞总数百分比，结合阳性细胞表达强度进行评分[2]，评分计算公式如下：S＝∑ei。其中S为评分最后得分；e为阳性细胞百分比评分：无阳性细胞为0分，≥1%~30%为1分，30%~60%为2分，＞60%~100%为3分；i为阳性细胞表达强度评分，用分析测量图像软件Image Pro Plus 6.0系统对图像进行扫描，根据累计吸光度值（IOD）评分：IOD≤15计0分，>15~45计1分，>45~75计2分，≥75计3分；S≥3分为阳性表达。
1.4 统计学方法应用SPSS17.0软件进行统计学处理，计数资料采用χ2检验；连续性校正χ2检验；生存分析采用Kaplan-Meier方法；预后影响因素的单因素分析采用Log rank检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果 2.1 B7-H1在各组中的表达免疫组织化学结果显示，B7-H1蛋白主要表达于细胞质，也可表达于细胞膜，见图 1。B7-H1蛋白在胆囊癌组中的表达高于胆囊腺瘤性息肉组（P=0.035）和癌旁非肿瘤组织组（P=0.003），差异有统计学意义，见表 1。
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| A: Positive expression of B7-H1 protein in corresponding non-tumor tissues(SP ×400); B: Positive expression of B7-H1 in gallbladder adenoma polyp tissues(SP ×200); C: Positive expression of B7-H1 in gallbladder carcinoma tissues(SP ×400) 图 1 B7-H1蛋白在不同组织中的阳性表达 Figure 1 Positive expression of B7-H1 protein in various tissues |
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胆囊癌组织中B7-H1蛋白的阳性表达在Nevin（Ⅳ+Ⅴ）期、TNM Ⅲ+Ⅳ期、淋巴结转移组高于Nevin（Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ）期（P=0.041）、TNM（Ⅰ+Ⅱ）期（P=0.049）、无淋巴结转移组（P=0.000），差异有统计学意义。与患者的性别（P=0.550）、年龄（P=0.360）、分化程度（P=0.366）差异均无统计学意义，见表 2。
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Kaplan-Meier生存分析显示，B7-H1蛋白阳性表达组的中位生存期为21.00月，95%CI（17.54~24.58月）；B7-H1蛋白阴性表达组的中位生存期为30.00月，95%CI（21.13~38.87月）。Log rank检验显示：B7-H1蛋白阳性表达患者三年生存期显著短于阴性表达患者（χ2=4.767，P=0.029），见图 2。
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| 图 2 胆囊癌中B7-H1阳性表达组和阴性表达组的Kaplan- Meier生存曲线 Figure 2 Kaplan-Meier survival curves of positive and negative expression of B7-H1 protein in gallbladder carcinoma tissues |
B7-H1（B7-homolog1）是B7家族中的共刺激信号分子之一，又称程序性死亡分子1配体1（PD-L1），是近年来发现的B7家族新成员，不同于其他B7家族分子的是它具有负向调节免疫应答的作用；在多种肿瘤细胞上高表达[3]。
本研究显示，B7-H1蛋白在癌旁非肿瘤黏膜、胆囊腺瘤性息肉及胆囊癌组织中均有表达；呈上升趋势，且胆囊癌组的表达高于癌旁非肿瘤黏膜组和胆囊腺瘤性息肉组，差异有统计学意义，提示B7-H1蛋白可能参与胆囊癌的发生。有研究报道[4]，B7-H1可结合T细胞表面表达的受体PD-1分子，传递抑制性信号，抑制T细胞功能，介导肿瘤免疫逃逸，可逃避T淋巴细胞的免疫监视作用；还可调节外周组织中T细胞耐受，有利于肿瘤细胞生长。还有研究发现[5]，B7-H1能下调E-cadherin表达，上调转录因子Twist、Slug表达，促进上皮细胞-间质转化，促进皮肤癌的发生。
有研究显示[6]，趋化因子CXCR4在众多肿瘤中高表达，通过与其受体CXCL12结合参与肿瘤的浸润和淋巴结转移；研究发现[7]共刺激因子B7-H1与CXCR4在膀胱移行细胞癌组织高表达且二者呈正相关，与膀胱移行细胞癌的临床分期、病理分级、复发等相关；认为两者在膀胱移行细胞癌的发展过程中起作用。还有研究发现[8]：B7-H1在结肠癌转移的淋巴结中高表达；B7-H1的受体PD-1在淋巴结中特异性高表达，认为B7-H1抑制淋巴细胞的增殖分化、免疫应答、促进淋巴细胞凋亡，有利于肿瘤细胞转移。此外，Parsa等[1]发现PTEN具有抑癌作用；可以逆转PI3K所催化的反应，负向调节PI3K/Akt通路，当它发生突变或缺失时，PI3K/Akt通路活性增强，参与基因转录、蛋白质翻译起始、细胞凋亡等多项细胞功能。而B7-H1蛋白在Akt激活时表达增多，所以PTEN的缺失或突变可通过激活Akt而致B7-H1蛋白表达的增加；参与肿瘤的浸润及转移。这些结果提示B7-H1在肿瘤细胞的异常表达与肿瘤进展有一定的关系；B7-H1也可能通过以上机制参与胆囊癌的发展。结合患者生存分析发现，B7-H1蛋白在胆囊癌中的表达水平与患者的预后呈负相关性，B7-H1蛋白在胆囊癌中的表达有可能成为胆囊癌预后判断的指标之一。此外，B7-H1在免疫及基因治疗方面已有相关的研究报道[9]，这为胆囊癌的干预治疗也提供了一个新的思路。| [1] | Parsa AT, Waldron JS, Panner A, et al. Loss of tumor suppressor PTEN function increases B7-H1 expression and immunoresistance in glioma[J]. Nat Med, 2007, 13(1): 84-8. |
| [2] | Maréchal R, Demetter P, Nagy N, et al. High expression of CXCR4 may predict poor survival in resected pancreatic adenocarcinoma[J]. Br J Cancer, 2009, 100 (9): 1444-51. |
| [3] | Dong H, Zhu G, Tamada K. B7-H1, a third member of the B7 family, co-stimulates T-cell proliferation and interleukin-10 secretion[J]. Nat Med, 1999, 5(12): 1365-9. |
| [4] | Blank C, Mackensen A. Contribution of the PD-L1/PD-1 pathway to T-cell exhaustion: an update on implications for chronic infections and tumor evasion[J]. Cancer Immunol Immunother, 2007, 56(5): 739-45. |
| [5] | Cao Y, Zhang L, Kamimura Y, et al. B7-H1 overexpression regulates epithelial-mesenchymal transition and accelerates carcinogenesis in skin[J]. Cancer Res, 2011, 71(4): 1235-43. |
| [6] | Dai X, Mao Z, Huang J, et al. The CXCL12/CXCR4 autocrine loop increases the metastatic potential of non-small cell lung cancer in vitro[J]. Oncol Lett, 2013, 5(1): 277-82. |
| [7] | Gong XH, Wang YH, Shao SX, et al. Expression and significance of B7-H1 and CXCR4 in bladder transitional cell carcinoma[J]. Qilu Yi Xue Za Zhi, 2013, 8(4): 286-8. [公欣海, 王永华, 邵世修, 等. 膀胱移行细胞癌组织B7-H1和CXCR4表达及其意义[J].]齐鲁医学杂志, 2013, 8(4): 286-8. |
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