神经降压素（neurotensin,NT）在生理状态下 广泛分布于脑和胃肠道中，通过与神经降压素受 体(neurotensin receptor,NTR)结合具有各种中枢和 外周效应。近年来研究者发现NT和神经降压素受 体1(neurotensin receptor1,NTR1)与多种恶性肿瘤的 发生、发展、增殖、侵袭、预后有关^{[ 1, 2, 3 ]}，但目前 对于NTR1在乳腺癌方面的研究报告较少。乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，其中浸润性导管癌 （invasive ductal carcinoma,IDC）占很大比例^{[ 4 ]}。本 研究采用免疫组织化学方法研究NTR1在浸润性导 管癌及导管内癌（ductal carcinoma in situ,DCIS） 中的表达情况，并分析NTR1在IDC中的表达与 临床病理特征和预后的关系，以期为乳腺癌的诊 断、预后及靶向治疗提供依据。 1 资料与方法 1.1 一般资料

收集天津医科大学附属肿瘤医院2003年1月至 2004年12月病理诊断为DCIS的样本60例，并随机 抽样128例诊断为IDC的样本，由两位副高级以上 病理医师参照2012年乳腺肿瘤WHO分类^{[ 5 ]}证实病 理诊断。患者均为女性，年龄26~82岁（中位年龄 53.6岁）。IDC 组织学分级Ⅰ+Ⅱ级99例、Ⅲ级29 例；pTNM分期Ⅰ期24例、Ⅱ期67例、Ⅲ期37例； 肿物最大径≤2 cm 62例，＞2cm 66例；淋巴结阳 性37例，阴性91例；＜40岁组15例，40~55岁组65 例，＞55岁组48例。绝经59例，未绝经69例；有 家族史组27例，无家族史组101例。术前均未接受 放化疗。 1.2 试剂及方法

兔抗人NTR1单克隆抗体购自Enzo Life Sciences公司。PBS、柠檬酸盐缓冲液(pH6.0)、即 用型封闭血清、3%H2O2、即用型免疫组织化学SP 法染色试剂盒、DAB显色液均购自北京中杉金桥 生物技术有限公司。主要实验步骤：石蜡切片常 规脱蜡、水化，用3%H2O2去离子水孵育10 min。 微波抗原热修复后，滴加一抗（1:150稀释），4℃ 冰箱过夜。滴加二抗，37℃保温箱孵育15 min。滴 加DAB溶液显色，复染、脱水、封片，光学显微 镜下观察，PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。 1.3 免疫组织化学结果判定

NTR1的染色结果评分标准参照文献^{[ 6 ]}并改进 低倍镜下选择5个有代表性的区域，然后在高倍视 野下进行计数，每个区域选 150~200个癌细胞，按 染色强度进行评分：0分为无色、1分为淡黄色、 2分为棕黄色、3分为棕褐色，每张切片的得分为5 个视野得分的平均值。按阳性细胞所占百分比进 行评分：0分为无阳性细胞着色、1分为阳性细胞 比例≤10%、2分为阳性细胞比例在10%~50%之 间、3分为阳性细胞比例在>50%~75%之间、4分为 阳性细胞比例>75%。将两项得分相乘得到该视野 的最终得分，乘积>3分评价为阳性。细胞间质和 正常组织阳性区域不计分。 1.4 随访情况

128例患者均从手术当日开始计算生存时间， 中位随访时间为55.7月。无瘤生存期限定为从手术 日到第一次发生局部复发或远处转移的时间。 1.5 统计学方法

应用SPSS 17.0统计软件进行数据分析，χ²检 验用于定性资料间的比较，单因素生存分析采用 Kaplan-Meier生存曲线和Log rank检验，多因素分 析采用Cox多因素分析模型。统计结果以P<0.05为 差异有统计学意义。 2 结果 2.1 NTR1在IDC与DCIS中的表达

NTR1在正常乳腺组织上皮细胞中不表达， 在DCIS和IDC中NTR1阳性表达着色在胞质中，见 图 1。比较 128例IDC及60例DCIS样本，在IDC中 NTR1阳性表达患者为91例，阳性率为 71.1%，在 DCIS中阳性表达患者为32例，阳性率为53.3%，两 者差异具有统计学意义（χ²=5.696，P=0.017）。

NTR1:neurotensin receptor-1;DCIS: ductal carcinoma in situ; IDC :invasive ductal carcinoma ; A:negative expression of NTR1 in normal breast tissue(×100);B: NTR1 expression was located in the cytoplasm of DCIS cells(×200);C: NTR1 expression was located in the cytoplasm IDC cells(×200);D: negative expression of NTR1 in DCIS(×100);E: negative expression of NTR1 in IDC(×100) 图 1 NTR1在正常乳腺组织、DCIS及IDC中的表达（SP） Figure 1 NTR1 expression in normal breast tissue,DCIS and IDC tissues (SP)

NTR1阳性表达在组织学分级、淋巴结状态、 肿物最大径中差异有统计学意义；在pTNM分期、 ER、PR、HER2、Ki67表达、年龄、绝经状态、 家族史等分组间差异无统计学意义，见表 1。

表 1(Table 1)

表 1 NTR1在乳腺浸润性导管癌中的表达及与病理参数的 关系 Table 1 Correlation between NTR1 expression and clinicopathologic index in IDC

表 1 NTR1在乳腺浸润性导管癌中的表达及与病理参数的 关系 Table 1 Correlation between NTR1 expression and clinicopathologic index in IDC

（1）生存情况及与NTR1表达的关系：128例 IDC患者5年总生存率为90.6%（116/128），NTR1 表达对生存曲线分布有明显影响，NTR1阳性表达 患者五年无瘤生存率为70.3%（64/91），明显低 于阴性表达组五年无瘤生存率91.9%（34/37）， Log rank检验显示差异有统计学意义（χ²=4.609， P=0.032），见图 2。随访期间，IDC中NTR1阳性表 达的患者乳腺癌复发率为33.0%（30/91）,NTR1阴 性表达的患者复发率为10.8%（4/37）（χ²=6.620， P=0.010）。（2）预后分析：应用Cox比例风险模 型对生存资料进行多因素分析，结果显示NTR1的 表达和淋巴结状态是无瘤生存期的独立影响因素 （P<0.05）。NTR1表达相对危险度（Rr=3.054） 大于1，当NTR1表达增强，风险函数升高，提示 NTR1是危险因素，见表 2。

图 2 128例IDC中NTR1阳性表达和NTR1阴性表达的无瘤 生存曲线 Figure 2 Kaplan-Meier survival curves of 128 invasive ductal carcinoma patients with NTR1 positive and negative expression

表 2(Table 2)

表 2 乳腺浸润性导管癌患者术后Cox多因素回归分析 Table 2 Cox multivariate regression analysis of clinicopathologic paramters in 128 IDC patients after surgery

表 2 乳腺浸润性导管癌患者术后Cox多因素回归分析 Table 2 Cox multivariate regression analysis of clinicopathologic paramters in 128 IDC patients after surgery

NT是一种含有13个氨基酸残基的单链多肽，已 知的NTR有3种亚型： NTR1、NTR2和NTR3^{[ 7 ]}。目 前在3种NTR中，研究较为透彻的是NTR1，它是NT 的高亲和力受体，NT及NTR1对多种恶性肿瘤的发 生、发展及预后的作用日益受到学者的关注^{[ 8 ]}。

一些研究者已初步探讨了NTR1与乳腺癌发生 发展的关系。Somaï等^{[ 9 ]}研究发现NTR1与NT结合 被激活后能够促进乳腺癌细胞中Bcl-2基因的转录 活化促进肿瘤细胞的生长。Zhao等^{[ 10, 11 ]}研究表明 NT与NTR1结合促使白介素-8的表达，通过激活 PI-3K/Akt导致细胞增殖。Souazé等^{[ 6 ]}检测到乳腺癌 细胞系MDA-MB-231中也有NT和NTR1的表达， 外源性NT激活NTR1后可加强癌细胞的运动和侵袭 性能。上述研究提示NTR1与乳腺癌的发生发展有 关，但对于乳腺癌中NTR1蛋白的表达情况和功能 尚无系统性研究。深入了解NTR1的功能和分子机 制有助于为阐明乳腺癌发生、发展的理论提供新 的内容，还将为判断乳腺癌转移风险、评估预后 提供新的标志物。

本组研究在人乳腺石蜡标本中采用免疫组织 化学方法分别检测乳腺DCIS和IDC组织中NTR1的 表达情况，同时分析NTR1的表达与临床病理学特 征和预后的关系。镜下可见在乳腺IDC和DCIS中有 明显的NTR1阳性着色，阳性定位于肿瘤细胞的胞 质。NTR1在IDC中的表达率明显高于DCIS中的表 达率，提示NTR1在乳腺癌进展中具有重要意义。 本组研究显示NTR1的表达与乳腺癌密切相关， Spearman相关分析显示在IDC中NTR1的表达与组 织学分级、淋巴结转移、肿物最大径均呈负相关。 NTR1阳性患者的5年无瘤生存率明显低于阴性患 者，复发率高于阴性表达者，提示NTR1阳性表达 的乳腺IDC患者预后较差。本组多因素分析显示， NTR1的表达影响术后无瘤生存期，是危险因素。 本组研究还提示，在乳腺癌中NTR1的表达不仅 对患者术后无瘤生存期的分布有影响，还是增加 死亡风险的因素，提示NTR1可作为估测IDC预后 的有效指标。因此可以通过检测NTR1的表达，更 好地判断乳腺癌的恶性程度，此外NT类似物为基 础的新型肿瘤显像剂及合成物已有一定研究，对 NTR1阳性乳腺癌的早期诊断和指导治疗有重要意 义，从而为乳腺癌的靶向治疗提供新的依据。