原发性肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC） 是常见的恶性肿瘤之一，其发病率仅次于肺癌， 约占国内全部癌症发病率的10%，且有逐年上升的 趋势^[1]。原发性肝癌术后复发转移率居高不下，预 后不理想，5年生存率仅为20%~30%^[2]。因此，研究HCC相关基因用以筛选理想的肿瘤标志物，探 讨HCC的发病机制并应用于肿瘤的临床治疗具有 重要的意义。

Formins蛋白家族的FMNL-2(formin-like 2)是细 胞骨架重塑的关键调控因子，在胃癌、乳腺癌及 结直肠癌等多种肿瘤组织中存在表达^{[3, 4]}，与肿瘤 的侵袭与转移密切相关。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPS)能够降解细胞外基质 (extracellular cell matrix,ECM)中各种蛋白成分， 通过破坏组织学屏障而影响肿瘤细胞的侵袭和转 移。本研究采用免疫组织化学Maxvision TM法检测 FMNL-2及MMP-2(matrix metalloproteinase-2)在肝 癌及癌旁组织中的表达及相关性，初步探讨两种 基因在肝癌发病机制中的意义。 1 资料与方法 1.1 标本

收集南昌大学第二附属医院病理科2007年— 2011年肝癌石蜡标本100例，所有患者术前均未行 化疗或放疗。其中男74例，女26例，年龄17~76 岁，平均51.1岁；AFP阳性68例，阴性32例； HBsAg阳性70例，阴性30例；巨块型34例，结节 型66例；伴肝硬化30例；有淋巴转移26例。所有 标本均取癌及癌旁组织（距肿块边缘≥5 cm处肝 组织），HE切片染色及免疫组织化学染色分析高 分化21例，中分化39例，低分化40例。全部病例 均经病理证实为肝细胞肝癌。 1.2 材料

鼠抗人FMNL-2单克隆抗体（1:50）购自 Abnova公司，鼠抗人MMP-2（即用型）单克隆抗 体、免疫组织化学染色试剂盒均购于福州迈新生 物技术有限公司。 1.3 方法

采用免疫组织化学染色Maxvision TM法分别检 测100例肝癌及癌旁组织中FMNL-2和MMP-2的表 达，操作步骤按试剂盒说明进行，DAB显色，苏 木精对比染色。用PBS代替一抗作阴性对照，已知 阳性标本切片作阳性对照。 1.4 结果判定

FMNL-2和MMP-2蛋白免疫组织化学染色阳 性表达定位于细胞质，呈棕黄或棕褐色颗粒，多 为弥漫性分布。采用图文分析软件IPP6.0，400倍 光学显微镜下选取相同条件（光源、亮度色彩饱和 度、增益对比）的5个随机视野区进行拍摄。所得图 片采用累积吸光度（IOD）测试指标进行定量分析。 1.5 统计学方法

应用SPSS19.0统计软件包进行分析，各组 数据以(x±s)表示，数据分析采用t检验及Pearson Correlation相关性分析。所有检验均为双侧概率检 验，检验水准为α＝0.05，以P<0.05为差异有统计 学意义。 2 结果 2.1 FMNL-2的表达

FMNL-2阳性表达定位于细胞质，呈棕色颗 粒分布，癌组内多为灶性及弥漫性；癌旁组以弥 漫性为主。FMNL-2在肝癌组织中呈高表达，IOD 为（90 748.36±46 276.91）；在癌旁组织中呈低表 达，IOD为（39 075.46±24 763.12），两组间差异 有统计学意义（t=10.509，P<0.05），见图A1、 B1。FMNL-2在阴性对照组中无表达。

图 1 肝癌及癌旁组织中FMNL-2 和MMP-2的表达（MaxvisionTM ×400 ） Figure 1FMNL-2 and MMP-2 expression in hepatocellular carcinoma and adjacent tissues（MaxvisionTM ×400 ）

MMP-2阳性表达为棕褐色或棕黄色，大多数 呈现弥漫性分布，定位于细胞质，少数细胞膜有 阳性表达。MMP-2在肝癌组织内高表达，IOD为 （87 969.46± 27 131.77）；在癌旁组织低表达， IOD为（59 517.72±20 218.23）。两组间差异有统 计学意义（t=10.509，P<0.05），见图A2图A2、B2。 MMP-2在阴性对照组中无表达。 2.3 肝癌组中FMNL-2和MMP-2的表达相关性

经Pearson Correlation相关性分析，肝癌组织 中FMNL-2和MMP-2蛋白均为高表达，癌旁组织 中均为低表达，两者间具有正相关性（r=0.240， P=0.016），差异有统计学意义（P<0.05）。 2.4 FMNL-2及MMP-2蛋白表达与HCC临床病理

特征的关系 FMNL-2在是否伴肝硬化组中IOD值分别为 (47 471.96±40 273.54）和（72 123.41±45 517.93） （P<0.05）；MMP-2在HBsAg阳性或阴性组中IOD 值分别为（77 668.34±27 682.79）和（64 585.83± 26 173.62）（P<0.05），在有无转移组中IOD值分 别为(63 854.73±21 730.42)和(77 218.05±28 930.01) （P<0.05）；其他各组数据间差异无统计学意义 （P>0.05），见表1。

表1(Table 1)

表1 肝癌患者临床病理特征与FMNL-2和MMP-2蛋白表达的关系 Table 1 Relationship between FMNL-2/MMP-2 expressions and clinicopathological features of HCC patients

表1 肝癌患者临床病理特征与FMNL-2和MMP-2蛋白表达的关系 Table 1Relationship between FMNL-2/MMP-2 expressions and clinicopathological features of HCC patients

肿瘤的发生及侵袭运动是以细胞的黏附、 运动及变形为基础的复杂过程，需要依赖一系 列细胞肌动蛋白骨架结构的改变。FMNL-2属于 Formins蛋白家族成员，在微丝的组装及重构过程中起关键调控作用，其高度保守的FH2功能域可促 进两个肌动蛋白单体聚合成二聚体，形成微丝成 核中心，启动微丝成核，并可维持细胞骨架中微 管的稳定性。而富含脯氨酸的FH1功能域可调控肌 动蛋白的成核活性，为不断延伸的微丝生长端提 供肌动蛋白单体，产生线性微丝^{[5, 6]}。

近几年来FMNL-2参与肿瘤发生、发展的报道 越来越多，各类研究显示FMNL-2在肿瘤细胞的侵 袭力方面有着重要作用，可以调节肌动蛋白骨架 的重构从而参与细胞运动、变形及胞质分裂等活 动，可能是肿瘤细胞向周边浸润和远处转移的重 要调控基因。Pang等^[2]通过生物信息学分析显示 FMNL-2基因定位于人类染色体2q23.3，是一类肿 瘤相关基因，通过Rho GTPase相关信号通路参与 肿瘤细胞极性控制及侵袭迁移等运动。Kitzing等^[7] 研究证实FMNL-2作为Rho C的特殊效应器，具有 促肌动蛋白成核的特征性FH2功能域，可通过调节 Rho GTPase来控制肌动蛋白骨架的重组，从而调 控细胞形态及侵袭运动。各项研究显示FMNL-2在 一些正常组织及胚胎组织中阳性表达，同时在乳 腺癌、胃癌、结肠癌等肿瘤组织中也存在高表达。 李余发等^[8]研究显示FMNL-2蛋白在高转移的结直 肠癌细胞系中相对高表达，FMNL2可能通过RasMEK-MAPK和PI3K-AKT两条信号通路促进大肠癌 发生EMT，从而经EMT促进大肠癌的细胞转移。

国内关于FMNL-2在肝癌的发生及发展机制方 面的研究极少，本研究采用免疫组织化学法初步 检测FMNL-2在肝癌及癌旁组织的表达情况及差 异，发现肝癌组织中存在FMNL-2的高表达，其 IOD平均值达到90 748.36，与癌旁组织的IOD平均 值39 075.46相比，差异有统计学意义。本实验主 要采用图文分析软件IPP6.0在相同条件下检测免疫组织化学结果，与人工计数方法相比，具有更好 的重复性，并可定性定量的客观分析。因此，免 疫组织化学法检测目的基因FMNL-2的蛋白表达是 否可作为临床诊断肝癌的参考指标，值得进一步探 讨。

细胞的迁移不仅是依靠细胞肌动蛋白骨架的 重构，基底膜的降解也是促使肿瘤细胞侵袭和转 移的关键环节。基质金属蛋白酶MMP-2是降解 细胞外基质及基底膜的关键酶，在肿瘤细胞的发 展过程中起重要作用。Yamamoto等^[9]研究显示原 发性肝癌中MMP-2的高表达与门静脉浸润、肝内 转移及术后复发相关，表明MMP-2在肝癌组织的 浸润转移中发挥重要作用。Yan g等^[10]发现肝癌组 织中MMP-2可降解ECM及基底膜的关键成分，破 坏组织结构，重塑ECM，促进肿瘤的生长及新生 血管的形成，同周边组织侵袭和远处转移密切相 关。

本研究显示肝癌组织中有MMP-2的高表达， 在癌旁组织内阳性表达较低，差异具有统计学意 义。HBsAg阳性的肝癌患者，其癌与癌旁组表达 差异明显，提示HBsAg指标阳性的患者比HBsAg 阴性的患者更有可能导致肝癌的发生。MMP-2 在有转移的肝癌组织中阳性表达明显高于无转移 组，显示MMP-2与肝癌细胞的侵袭转移有着密切 关系，MMP-2是否可作为临床诊断肝癌转移的参 考指标尚待验证。

本研究还发现FMNL-2和MMP-2蛋白表达具有 相关性，在FMNL-2高表达的肝癌组织中，MMP-2 也呈现过表达的现象。Liang等^[11]研究显示在结直 肠癌中，FMNL-2的信使RNA即MicroRNA-137表 达水平的提高和FMNL-2表达水平的降低会抑制信 号通路Akt和MAPK的磷酸化，降低MMP-2的表 达，导致结直肠癌细胞侵袭性下降。肝癌组织内 FMNL-2与MMP-2的相关作用机制尚无报道，两者 表达水平的差异是否存在拮抗或协同作用、如何影 响肝癌细胞的发生发展机制，尚待进一步研究。