临床报道，某些化疗药物（如长春新碱、紫杉 醇类、铂类等）在抗肿瘤同时可引起患者痛觉过 敏，导致神经病理性疼痛，简称化疗痛^[1]。近年来, 有研究发现在一些疼痛模型中作为细胞间信号传递 分子的细胞因子不仅参与了外周痛觉信息的传递和 调制，而且还可能在脊髓中枢参与对痛觉信息的调 制^{[2, 3]}。在长春新碱致神经病理性疼痛模型中，前 炎性细胞因子IL-1β和TNFα的表达增加，提示其在 化疗痛的产生与维持中发挥作用^[4]。有研究表明， 传统中药天麻的主要有效成分天麻素(gastrodin， Gas)，有镇痛、镇静及神经保护作用^[5]，但其对化 疗痛的防治作用及其机制未见报道。本文主要研 究天麻素对长春新碱诱导大鼠化疗痛模型的治疗作用及其对脊髓IL-1β和TNFα表达的影响，探讨其 在脊髓水平中的作用机制。

SPF级SD雄性大鼠，200～260 g，由华中 科技大学实验动物中心提供(生产许可证号： SCXK(鄂）2010-0009)；长春新碱（购自浙江海正 药业股份有限公司，批号：H20042326）用0.9% 氯化钠溶液配制成0.0125%浓度；天麻素（购自 广东邦民制药厂有限公司，批号：101004）用 0.9%氯化钠溶液分别配制成0.6%、1.2%、2.4%三 种不同的浓度；ELISA试剂盒（购自武汉博士德 生物工程有限公司）；电子Von Frey测痛仪为意 大利瑞沃德公司出品；PL-200热辐射仪(购自成 都泰盟科技有限公司)；全波长酶标仪（美国， TYPE1500-458）。

SD大鼠按随机区组法分为5组，每组 6只，分别为：对照组、模型组、天麻素小、中、 大剂量组（30、60、120 mg/kg）。测机械痛阈和 热痛耐受时间。以第1次注射长春新碱当天为第1 天，除对照组用0.9%氯化钠溶液对照外，其他四 组大鼠隔日上午均腹腔注射长春新碱125 μg/kg， 共4次，建立化疗痛模型，模型成功建立后，即于 第9天开始，继续腹腔注射长春新碱，给药方案和 剂量同上，同日下午3个天麻素组分别腹腔注射不 同剂量的天麻素，对照组和模型组同步注射0.9% 氯化钠溶液作为对照（0.5 ml/100 g），于使用天 麻素1周后测定一次机械刺激、热刺激痛阈值。

采用电子Von Frey 测痛仪测定大鼠对机械刺激的反应，分别于给药前 和给药后第8天、第16天测定大鼠的机械痛阈值。 用细针接触刺激大鼠的后趾足底，每次刺激间隔15 min，左右足各五次，记录大鼠出现撤足反应时的力 度。以大鼠撤足的力度反映大鼠机械刺激痛阈值。

用热辐射法进行 热痛阈值的测定，测定时间同上。环境保持安静, 室温恒定于(22±1)℃ ,将大鼠放在玻璃板上，用 有机玻璃观察框将其罩住，待其适应环境20 min 后，应用热痛觉测试仪测试热痛阈。设定刺激强 度为35% 的光强度刺激,聚光光源从下方直接照射 左、右侧后爪足底,记录由照射到大鼠缩脚的时间 作为热痛阈值，单位为s，重复测定三次，每次间 隔15 min，单次光照射时间不超过20 s， 以免造成热辐射损伤。以3次测定结果的平均值作为大鼠热 痛阈值。

IL-1β和TNFα的测定 于末次治疗第2天， 大鼠用20%乌拉坦深麻醉下断头处死。取出脊髓 腰膨大处，加入预冷的0.9%氯化钠溶液，用匀浆 器按1∶9（W/V）的比例制成10%的组织匀浆，于 4℃，3 500 r/min 离心10 min，提取上清液于-20℃ 冻存待测。细胞因子IL-1β和TNFα的测定采用 ELISA法，严格按照试剂盒要求操作。

采用 SPSS13.0统计软件包进行统计分析，按照随 机分组的方差分析和两两比较对数据进行统计处理， 计量资料以 x±s 表示，P<0.05为差异有统计学意义。

给药前5组大鼠的基础痛阈差异无统计学意 义 (P>0.05)。注射长春新碱7天后，在机械力刺 激下，各组与对照组比较，机械痛阈值明显降低 (P<0.01)，表明长春新碱诱导的大鼠机械痛觉过敏 模型成功建立；随后腹腔注射天麻素7天后，天麻 素小、中、大剂量组与模型组比较机械痛阈值显 著升高（P<0.01），见表1 ，提示天麻素对机械痛 有缓解作用。

表1(Table 1)

表1 天麻素对化疗痛大鼠机械痛阈值变化的影响[(x±s)/g] Table 1 Effect of gastrodin on mechanical pain threshold in chemotherapy-induced neuropathic pain rats[(x±s)/g] Notes:Gas:Gastrodin;compared with NS group,**:P<0.01; compared with VCR model group,##:P<0.01

表1 天麻素对化疗痛大鼠机械痛阈值变化的影响[(x±s)/g] Table 1 Effect of gastrodin on mechanical pain threshold in chemotherapy-induced neuropathic pain rats[(x±s)/g]

给药前各组大鼠的热痛阈值差异无统计学意 义 (P>0.05)。腹腔注射长春新碱7天后，各组与 0.9%氯化钠溶液对照组比较热痛阈值明显降低， 且差异有统计学意义(P<0.01)，表明长春新碱诱导 的大鼠热痛觉过敏模型建立成功；用天麻素腹腔 注射治疗7天后，天麻素各剂量组与模型组比较热 痛阈值显著提高（P<0.05），见表2 ，提示天麻素 能提高化疗痛大鼠的热痛阈值。

表2(Table 2)

表2 天麻素对化疗痛大鼠热痛阈值的影响[(x±s)/s] Table 2 Effect of gastrodin on thermal pain threshold in chemotherapy-induced neuropathic pain rats [(x±s)/s] Notes:compared with NS control group,*:P<0.05，**:P<0.01;compared with VCR model group,#:P<0.05

表 2 天麻素对化疗痛大鼠热痛阈值的影响[(x±s)/s] Table 2 Effect of gastrodin on thermal pain threshold in chemotherapy-induced neuropathic pain rats [(x±s)/s]

与对照组比较，模型组脊髓IL-1β和TNFα的表达增加（P<0.01）；与模型组比较，3个天麻素治疗组 脊髓IL-1β和TNFα的表达减少（P<0.01），见表 3 。

表3(Table 3)

表3 脊髓IL-1β和TNFα含量的变化 Table 3 The change of contents of IL-1β and TNFα in spinal cord Notes:**:compared with NS control group,P<0.01;##:compared with VCR model group,P<0.01

表 3 脊髓IL-1β和TNFα含量的变化 Table 3 Effect of gastrodin on thermal pain threshold in chemotherapy-induced neuropathic pain rats [(x±s)/s]

目前，关于化疗药物致神经病理性疼痛的机 制尚存在争议，主要有以下几种可能的机制：化 疗药物可引起表皮内神经纤维减少和朗格汉斯细 胞活化^[7]；导致细胞Ca2+平衡的调节异常^[8]；化疗 药物致外周神经损伤后，兴奋性氨基酸在脊髓背 角释放增多，进而引起脊髓背角神经元突触后膜 上NMDA受体活化，钙离子内流增加，反馈性的 使NMDA受体功能上调放大疼痛刺激^[9]；脊髓胶质 细胞（主要是星型胶质细胞和小胶质细胞）在神 经病理性疼痛的产生和维持中起重要作用^[10]。近 年来，研究表明，炎性细胞因子IL-1β和TNFα与神 经病理性疼痛关系密切，其可能机制涉及: （1） 激活炎症细胞，加重炎性反应；（2）促进兴奋性 氨基酸、P物质、缓激肽、一氧化氮、氧自由基等 的释放，敏化脊髓背角神经元等^[11]。

本实验采用长春新碱建立化疗痛大鼠模型， 观察天麻素对化疗痛大鼠模型脊髓IL-1β和TNFα表 达变化的影响。通过行为学结果发现，隔日腹腔 注射长春新碱4次后，可以制作稳定的大鼠化疗痛 模型，在继续使用长春新碱的同时，加用天麻素 治疗，连续给药7天后，化疗痛大鼠机械痛阈值明 显升高，热痛阈值也明显提高。提示天麻素可抑制长春新碱诱导的大鼠化疗痛反应。

双抗体夹心ELISA法结果显示，使用天麻素治 疗1周后，模型组脊髓IL-1β和TNFα含量上升，而天 麻素治疗后，各组脊髓IL-1β和TNFα含量明显少于 模型组，说明天麻素可抑制化疗痛大鼠脊髓IL-1β和 TNFα的表达。由此可见，天麻素减轻大鼠化疗痛反 应可能与抑制大鼠脊髓IL-1β和TNFα表达有关。

有研究报道^{[12, 13, 14]}，脊髓中的促炎细胞因子IL- 1β、IL-6、TNFα等通过与特异性受体结合激活胶质 细胞和神经元，可诱发疼痛产生；另有研究报道^[4]， 胶质细胞参与了长春新碱致神经病理性疼痛的产 生。长春新碱可能通过活化脊髓胶质细胞，促使其 释放炎性因子IL-1β和TNFα，引起脊髓中枢敏化， 导致痛觉过敏或超敏反应，诱发化疗痛。天麻素可 减少其炎性因子释放，抑制脊髓中枢敏化反应，从 而提高模型组大鼠的痛阈值，减轻大鼠化疗痛反 应。由此推测，天麻素可能是通过抑制胶质细胞的 活化，减少炎性因子的释放而发挥治疗作用。

目前，有研究证实^{[15, 16]}，天麻素对缺血再灌注 损伤的脑细胞、星型胶质细胞以及对谷氨酸致培 养皮层神经细胞损伤均有保护作用。所以，天麻 素减轻化疗痛的作用机制也可能还与其他因素有 关，如可能通过增加谷氨酸转运体的作用、减少 兴奋性氨基酸在脊髓背角的释放以及调节Ca2+的平 衡等有关。这些将有待进一步研究证实。