鼻型NK/T细胞淋巴瘤（ENKTCL）是一种 罕见的非霍杰金淋巴瘤，在亚洲和拉丁美洲国家 发病率高于世界其他国家。中国属于NK/T细胞 淋巴瘤的流行地，鼻型NK/T细胞淋巴瘤占鼻型 NHL的74%~96%^[1]，通常表现一个高侵袭性的临 床过程，其病因学尚不十分清楚，然而已经证实 ENKTCL与EB病毒感染有关，而与患者种族及地 域无关，还与职业种类有关，某些职业如农民由 于接触杀虫剂及化学溶剂，发病率会高于其他行 业者^[1]。

基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)最主要的功能是降 解和破坏细胞外基质中的 Ⅳ、Ⅴ型胶原和明胶， 还能促进血管生成及增强上皮细胞的运动能力， 对肿瘤的外侵具有重要意义。MMP-26是2000年 新近发现的基质金属蛋白酶成员，具有广泛的底 物特异性，可以降解多种物质，如Ⅰ型明胶、Ⅳ 型胶原、纤连蛋白、纤维蛋白原、玻连蛋白，它 还可以特异水解α1 蛋白水解酶抑制剂(α1-PI) 、胰 岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP 1)，灭活丝氨 酸蛋白酶抑制剂及肿瘤坏死因子α转化酶(TACE) 底物等^{[2, 3]}。最近的一些研究表明MMP-26在多种 恶性肿瘤表达^{[2, 3]}，提示其可能与肿瘤的进展及 侵袭有关。本研究采用免疫组织化学SABC法检 测30例ENKTCL组织及20例反应性淋巴结增生组 织MMP-9、TIMP-4、MMP-26的表达情况，分析 ENKTCL与基质金属蛋白酶及其抑制剂之间的关 系并探讨其意义。 1 资料与方法 1.1 一般资料

收集本院2009年1月至2011年12 月间病理 活检的ENKTCL标本30例，男21例，女9例，年 龄22～69岁。所有病例均做免疫组织化学CD3、 CD20、CD56检测，按照WHO2008 年淋巴造血组 织肿瘤分类方案进行重新分类诊断^[4] 。临床分期 根据Ann Arbor分期标准：Ⅰ～Ⅱ期9例，Ⅲ～Ⅳ 期21例。所有患者术前未经放疗和化疗。对照组 为20例反应性增生性淋巴结炎，其中男13例，女7 例，年龄6～72岁，中位年龄53岁。 1.2 检测方法

用免疫组织化学SABC法检测ENKTCL和反 应性淋巴结增生两组MMP-26、TIMP-4、MMP-9 表达，所用抗体均购自广州华拓生物科技有限公 司，免疫组织化学试剂盒购自武汉博士德生物科 技有限公司。具体操作步骤参照产品说明书进 行。用已知染色阳性的腹壁异位子宫内膜组织切 片为阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。 1.3 结果判定

MMP-26、TIMP-4、MMP-9的免疫染色主 要定位于淋巴细胞的细胞质。根据肿瘤细胞阳性 表达染色强度和阳性细胞数百分比评分，染色强 度评分为：无色或与背景均匀一致的淡黄色为0 分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分 (细胞着色深浅需与同一切片背景着色对照)。阳性 细胞数百分比评分：阴性为0分，≤10%为1分， 10%～50%为2分，＞50%～75%为3分，＞75%为4 分。两积分乘积：0～3分为阴性(－)，3～6分为弱 阳性(+)，6～9分为中等阳性(++)，9～12分为强阳 性(+++)。 1.4 统计学方法

应用SPSS 13.0统计软件进行分析。两组表达 率的差异用采用χ²检验。检验水准α=0.05，以P≤ 0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 MMP-26、TIMP-4和MMP-9在鼻型NK/ T细胞淋巴瘤和淋巴结反应性增生组织中的表达情况

MMP-26 定位于细胞质，鼻型NK/ T细胞淋巴 瘤组织中MMP-26阳性表达率为76.67%(23/30)， 反应性增生的淋巴结组织中MMP-26阳性表达率 为10% (2/20)，见图1A、1B，MMP-26在ENKTCL 中的阳性表达率均明显高于淋巴结反应性增生 组织，差异有统计学意义(P<0.05)。TIMP-4 定 位于细胞质，ENKTCL 组织中TIMP-4阳性表达 率为46.67 %(14/ 30)，反应性增生的淋巴结组织 中TIMP-4阳性表达率为5% (1/20) ，见图1C、 1D，TIMP-4在ENKTCL中的阳性表达率均明显 高于淋巴结反应性增生组织，差异有统计学意义 (P<0.05)。MMP-9 定位于细胞质中，ENKTCL组 织中MMP-9 阳性表达率为83. 33 %(25/30) ，反应 性增生的淋巴结组织中MMP-9阳性表达率为15% (3/20) ，见图1E、1F，MMP-9在ENKTCL中的阳 性表达率均明显高于淋巴结反应性增生组织，差 异有统计学意义(P＜0.05)。

图1 MMP-26、TIMP-4和MMP-9在ENKTCL和淋巴结反应性增生组织中的表达(IHC ×400 Figure 1 Positive expressions of MMP-26,TIMP-4 and MMP-9 in ENKTCL and reactive hyperplasia lymphnode (IHC × 400 )

不同性别、年龄的患者MMP-26、TIMP-4、 MMP-9的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。 MMP-26在ENKTCLⅢ期、Ⅳ期的表达高于Ⅰ期、 Ⅱ期(χ²=7.462，P <0.05)；MMP-9在ENKTCL Ⅲ 期、Ⅳ期的表达高于Ⅰ期、Ⅱ期(χ²=7.142，P <0.05)； TIMP-4的表达与临床分期无相关性(χ²=0.408，P >0．05)，见表1。

表1(Table 1)

表1 ENKTCL中MMP-26、TIMP-4和MMP-9的表达及与临床指标之间的关系 Table 1 MMP-26，TIMP-4 and MMP-9 expression in ENKTCL and clinicopathologic indictors

表1 ENKTCL中MMP-26、TIMP-4和MMP-9的表达及与临床指标之间的关系 Table 1 MMP-26，TIMP-4 and MMP-9 expression in ENKTCL and clinicopathologic indictors

MMP-26和TIMP-4在ENKTCL中的表达无相 关性(χ²=1.201，P＞0.05)。ENKTCL中MMP-26和 MMP-9的表达呈正相关(rs= 0.636，P＜0.05)，见 表2。

表2(Table 2)

表2 ENKTCL中MMP-26的表达及与TIMP-4、MMP-9表达的相关性 Table 2 Correlations among MMP-26,TIMP-4 and MMP-9 in ENKTCL

表2 ENKTCL中MMP-26的表达及与TIMP-4、MMP-9表达的相关性 Table 2 Correlations among MMP-26,TIMP-4 and MMP-9 in ENKTCL

鼻型NK/T细胞淋巴瘤通常指原发于中线面部 且有特殊的形态学、免疫表型和生物行为的肿瘤 ^[5]，是来源于T细胞或NK细胞的非霍奇金淋巴瘤 ( non-Hodgkinlymphoma,NHL)，多原发于鼻部， 故而得名。临床表现侵袭性强，常表现为鼻腔溃疡，中线面部破坏。病程后期，鼻型NK/T细胞 淋巴瘤组织会播散至皮肤、胃肠道、骨髓等处， 并出现嗜血细胞综合征和弥散性血管内凝血等全 身症状^{[6, 7]}。最近有ENKTCL侵犯心脏的报道^[8]。 并对其病因学进行研究发现，其发病与肿瘤间质 相关^[6]。传统的观点认为，肿瘤发展是以肿瘤细 胞为主体的细胞自主性程序，而肿瘤间质由结缔 组织和血管组成，起着支持和营养肿瘤实质的作 用。但目前有越来越多的证据表明，间质成分在 肿瘤发展中几乎扮演着同等重要的角色。当机体 发生肿瘤时，肿瘤细胞可释放各种趋化因子，从 而引起血管新生，促进肿瘤浸润和转移^[6]。在肿 瘤的发展过程中，肿瘤细胞与细胞外基质表面的 整合素受体及各种非整合素受体结合，结合后的 肿瘤细胞直接分泌或诱导宿主细胞以酶原形式分 泌MMP-9^[9]，它是基质金属蛋白酶家族(MMPs) 中分子量最大的酶，被激活后形成Ⅳ型胶原酶， 主要功能是降解和破坏细胞外基质中的胶原和明 胶，造成细胞外基质结构破坏，有利于肿瘤细胞 沿着降解破坏的细胞外基质向周围组织侵袭和转 移。研究表明，MMP-9、MMP-2在NHL中高表 达，且与AnnArbor临床分期有关，提示MMP-9、 MMP-2参与了NHL的发生和发展，与恶性淋巴瘤 的高侵袭性密切相关^{[10, 11, 12]}。Sakata等^[13]研究发现， MMP-9阳性NK／T细胞淋巴瘤总生存率比阴性者 低。黄振录等^[14]发现，绝大部分黏膜成熟T细胞和 NK细胞淋巴瘤表达MMP-9，62.71%呈强阳性表 达，而在黏膜良性淋巴组织增生中只有32.26%表 达MMP-9，且均为弱阳性表达，阳性细胞为浆细 胞和淋巴滤泡生发中心细胞。他们认为，MMP-9 有助于鉴别淋巴瘤与黏膜良性淋巴组织反应性增 生，MMP-9强表达者提示为恶性。本研究显示， 鼻型NK/T细胞淋巴瘤MMP-9表达率远高于反应性 增生淋巴结炎，这与黄振录^[14]及陈曦等^[15]研究结 果一致，本实验还发现MMP - 9在鼻型NK/T细胞 淋巴瘤中表达，与AnnArbor临床分期有关。因此 认为MMP-9与鼻型NK/T细胞淋巴瘤的发病及高度 侵袭性间有着密切关系。

MMP-26可以降解ECM多种成分，也可以降 解多种非ECM蛋白，如胰岛素样生长因子结合蛋 白-1(IGFBP 1)和α1-蛋白酶抑制剂。最近一些研究 表明MMP-26在子宫内膜癌、乳腺癌、结肠癌、 肺癌、前列腺癌、黑色素瘤等多种恶性肿瘤中表 达^{[2, 3]}，提示其可能与肿瘤的进展与侵袭有关 。但 MMP-26与淋巴瘤的关系国内外文献罕见报道， Zhao等^[3]研究结果显示MMP-26在大脑肿瘤以及头 颈部肿瘤均高表达，在正常淋巴结组织以及NHL 中均有表达，但两者未见差异性。本研究表明， 与淋巴结反应性增生组织比较，MMP-26高表达 于ENKTCL肿瘤细胞，这可能与ENKTCL细胞来 源的特殊性及其高侵袭性有关。分析其与临床分 期间的关系，发现MMP-26与ENKTCL临床分期有 相关性，其中Ⅲ、Ⅳ期的表达高于Ⅰ、Ⅱ 期。因 而，NK/T细胞淋巴瘤的高度侵袭性除可能与肿瘤 组织高表达MMP-9 、MMP-26等蛋白有关，这些 蛋白能够催化降解基底膜与细胞外基质，有利于 肿瘤细胞沿降解破坏的细胞外基质向周围组织侵 袭和转移。此外，MMP-26及MMP- 9协同高表达于 ENKTCL肿瘤细胞，因此可能通过激活MMP- 9发 挥其作用，促进ECM成分的有效降解并促进具有 高侵袭性及转移性的ARCaP细胞的侵袭力从而促 进肿瘤的侵袭、血管新生和转移^[3]。

基质金属蛋白酶抑制剂TIMP有4种亚型，分 别为TIMP-1 、TIMP-2 、TIMP-3、TIMP-4，有报 道认为TIMP-4 对MMP-26 的抑制活性最强^[11]。多 数实验结果均表明TIMP-1 、TIMP-2 、TIMP-3 的 表达在癌组织中明显增高，并随着肿瘤恶性程度 的增加而逐渐增强。关立华等^[2]对子宫内膜癌研究 后指出，TIMP-4 的表达模式与MMP-26相似,但二 者具有与其他MMPs 和TIMPs不同的表达模式，在 子宫内膜癌上低表达，与ER-α可能参与了MMP-26 和TIMP-4 基因水平的调节有关。本研究表明， TIMP-4 在淋巴瘤中也具有一定的表达，且明显高 于淋巴结反应性增生。但未发现TIMP-4 的表达与 MMP-26的表达间的相关性。这提示，MMP-26、 TIMP-4的表达及其对肿瘤的作用可能与肿瘤组织 来源的类别有关。

MMP-26、MMP-9这两个基质金属蛋白酶成员 可能参与了ENKTCL的发生和侵袭，可能成为诊 断ENKTCL的分子标记，并有助于对DLBCL恶性 程度及预后的预测，其本身可能作为一个潜在的 治疗靶点。