摘要: 引言肿瘤细胞端粒酶RNA有11个核苷酸为端粒合成的模板,本研究利用反义寡核酸的靶向作用封闭端粒酶RNA模板序列,干预端粒合成,有望使永生化细胞的无限增殖受限。1材料与方法1.1材料肝癌细胞株:SMMC-7721,正常肝细胞株:L-02,购自中科院上海细胞生物技术研究所;TRAP反应试剂(宝灵曼公司产品);Beckman CS-15R低温离心机,Perki mn-El mer PCR仪,MK-2酶标仪。1.2方法1.2.1端粒酶硫代反义、正义及随机序列寡核苷酸由中科院上海细胞所合成与纯化,纯度为98%。序列如表1所示。表1端粒酶模板区反义、正义及随机序列寡核苷酸序列位置1.ANTISENSE GTTAGGGTTAGACAAAAAAT56~362.SENSE TTTGTCTAACCCTAACTGAG45~653.CONTROL-SCRAMBLED TTTGTCTAACCCTAACTGAG1.2.2合成寡核苷酸对肝癌细胞端粒酶活性的影响1×106SMMC-7721肝癌细胞培养于含10%热灭活小牛血清的1640培养液中(37℃、5%CO2)。正义、随机、反义寡核苷酸终浓度为10μmol/L(PBS为对照),作用时间...