Effects of Tspan8 Gene Knockout Combined with Anlotinib on Proliferation, Migration, Invasion and Apoptosis of Colon Cancer SW480 Cells
-
摘要:目的
探讨Tspan8基因敲除联合安罗替尼对结肠癌SW480细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。
方法采用CRISPR/Cas9技术构建质粒并敲除SW480细胞的Tspan8基因，Western blot法检测敲除效果。采用MTT法计算安罗替尼的半数抑制浓度（IC50）。实验分为对照组、安罗替尼组、Tspan8敲除组和联合组。采用细胞增殖实验、克隆形成实验、划痕实验、Transwell小室法和流式细胞术检测各组细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡情况；Western blot法检测安罗替尼对SW480细胞中Tspan8表达水平的影响。
结果在Tspan8敲除组中，SW480-KO-Ⅲ细胞的敲除效率最高，用于后续实验。不同浓度的安罗替尼在不同作用时间均能抑制SW480细胞的增殖（P < 0.01），且呈浓度依赖性和时间依赖性（P < 0.01），根据IC50选择14 μmol/L为后续实验浓度。与对照组相比，安罗替尼组、Tspan8敲除组和联合组的细胞增殖、迁移及侵袭能力显著降低，细胞凋亡水平明显提高（P < 0.05），且联合组的上述变化较安罗替尼组或Tspan8敲除组更为显著（P < 0.05）。与对照组相比，安罗替尼组SW480细胞的Tspan8表达水平明显下降（P < 0.01）。
结论Tspan8基因敲除联合安罗替尼能协同抑制SW480细胞增殖、迁移、侵袭，并促进其凋亡。
Abstract:ObjectiveTo investigate the effects of Tspan8 gene knockout combined with anlotinib on the proliferation, migration, invasion, and apoptosis of colon cancer SW480 cells.
MethodsThe plasmid was constructed by CRISPR/Cas9 technique, and Tspan8 gene was knocked out in SW480 cells. The knockout effect was detected by Western blot. The IC50 of anlotinib was calculated by MTT assay. The experiment was divided into control group, anlotinib group, Tspan8 knockout group, and combined group. Cell proliferation, migration, invasion, and apoptosis were detected by cell proliferation assay, clonal formation assay, scratch assay, Transwell chamber assay, and flow cytometry. Western blot was used to detect the effect of anlotinib on Tspan8 expression in SW480 cells.
ResultsSW480-KO-Ⅲ cells had the highest knockout efficiency in the Tspan8 knockout group. They were used in subsequent experiments. Different concentrations of anlotinib could inhibit the proliferation of SW480 cells at different times (P < 0.01) in a concentration-dependent and time-dependent manner (P < 0.01). According to IC50, 14 μmol/L was selected as the subsequent experimental concentration. Compared with those in the control group, the cell proliferation, migration, and invasion abilities in the anlotinib group, Tspan8 knockout group, and combined group were significantly decreased, and the cell apoptosis level was significantly increased (P < 0.05). The above changes in the combined group were more significant than those in the anlotinib group or Tspan8 knockout group (P < 0.05). Compared with that in the control group, the expression level of Tspan8 in SW480 cells in the anlotinib group was significantly decreased (P < 0.01).
ConclusionTspan8 gene knockout combined with anlotinib can synergistically inhibit the proliferation, migration and invasion of SW480 cells. This combination can also promote the apoptosis of these cells.
-
Key words:
- Colon cancer /
- Anlotinib /
- Tspan8 /
- Cell proliferation /
- Cell invasion
-
0 引言
食管癌是因消化道肿瘤死亡的主要原因之一，食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma, ESCC）约占全球食管癌的90%[1]，因早期症状不明显，确诊时大部分患者已处于进展期，失去最佳根治手术时机，根治性同步放化疗（concurrent chemoradiotherapy, CCRT）是进展期ESCC的主要治疗方案[2]。临床实践中放化疗后的急性不良反应（acute adverse reactions, AAR）仍然困扰着医师和患者，且AAR随剂量的积累而增加，以中晚期患者为著[3]。铂类化疗通常会引起以血液学毒性和胃肠道毒性为主的不同类型急性不良反应，≥3级AAR可导致剂量减少、治疗延迟甚至终止放化疗，从而疗效不佳[4]。因此，个体化治疗方案有利于平衡疗效和AAR，使更多的患者获益。ESCC同步放化疗前CT检查既可评估肿瘤临床分期，亦可定量评估骨骼肌等身体成分变化[5]。有研究[2-6]表明骨骼肌量减少与多种癌症生存期缩短及治疗时AAR增加相关，去脂肪身体成分（主要为骨骼肌量）存在差异，放化疗后AAR亦不同，且大多数进展期ESCC患者因吞咽困难、疼痛、全身炎性反应和代谢率增加存在不同程度的骨骼肌量减少等，但进展期ESCC放化疗前肌肉减少症相关身体成分与同步放化疗AAR的关系仍存在争议。Dijksterhuis等[6]认为食管癌治疗前骨骼肌密度降低、肥胖型肌少症与3~4级剂量限制性毒性有关，而Ota等[7]发现治疗前骨骼肌减少症与化疗相关AAR无关；本研究目的是探讨进展期ESCC患者放化疗前骨骼肌减少症相关的身体成分变化与AAR、生存率的相关性。
1 资料与方法
1.1 病例选择及一般资料
回顾性收集徐州市肿瘤医院2018年8月—2022年7月期间符合标准的患者。纳入标准：（1）经病理确诊且临床TNM分期Ⅱ期以上（AJCC第8版[2]）、预行同步放化疗的进展期ESCC患者；（2）可检索到治疗前血清白蛋白及中性粒细胞与淋巴细胞比例，包括L3双侧横突层面的中上腹部CT、胸部CT；（3）美国东部肿瘤协作组评分标准≤2分且年龄 > 18岁，无主要器官功能障碍；排除肿瘤相关资料不全（如身高、体重、肿瘤治疗相关不良反应等）的患者。本研究通过徐州市肿瘤医院伦理委员会审批。
1.2 CT检查及身体成分测量
同步放化疗前所有患者行胸部及上腹部能谱CT扫描（美国GE，Discovery CT-750HD），并将图像传输至工作站（ADW4.7，美国），根据文献描述方法[8]，采用半自动化手工测量，以腰3横突为标志，在连续两层轴位图像上测量骨骼肌[（包括腰肌、椎旁肌（竖脊肌、腰方肌）和腹壁肌（腹横肌、内外斜肌、腹直肌）]和脂肪组织的横截面积（人工勾画腹壁肌肉、皮下脂肪、内脏脂肪边界，骨骼肌以-29~190 HU、皮下脂肪及肌肉间脂肪以-190~-30 HU、内脏脂肪以-150~-50 HU为阈值，软件自动算出骨骼肌、皮下脂肪、内脏间脂肪体积，再除以5 mm层厚），取两次平均值为骨骼肌面积（total muscle area, TMA）、皮下脂肪面积、内脏间脂肪面积，同时测量腰大肌的CT值，再通过公式：骨骼肌指数（skeletal muscle index, SMI）=TMA（cm2）/身高2（m2）、无脂骨骼肌量（fat-free mass, FFM, kg）=6.06+0.3×TMA（m2）、无脂体指数（fat-free mass index, FFMI）（kg/m2）=总FFM/身高2（m2）、脂肪量（fat mass, FM）（kg）=11.2+0.042×L3（皮下脂肪+内脏间脂肪量）、脂肪指数（fat mass index, FMI）（kg/m2）=总FM/身高2（m2）[8]，计算出SMI、FFMI、FMI；体表面积（body surface area, BSA）（m2）={[高度（cm）×体重（kg）]/3 600}1/2。以SMI < 55 cm2/m2（男）、SMI < 39 cm2/m2（女）为标准诊断肌肉减少症[8]，本组病例分为肌少症组和非肌少症组。
1.3 治疗方案、急性不良反应评估
所有患者均接受三维适形调强放疗，参照食管造影、CT及胃镜显示食管癌病灶及阳性淋巴结情况勾画靶区，并适当修改邻近危险器官剂量，95%计划靶区处方剂量为56~64 Gy，1次/天，5次/周，1.8~2 Gy/次，28~32次完成，心脏、肺平均剂量分别≤30 Gy、15 Gy，脊髓最大剂量≤45 Gy。同步接受2周期FP方案化疗：5-Fu 450~500 mg/m2×5 d，顺铂25~30 mg/m2×（3~5）d；28 d为1周期；为消除混杂因素影响，对肌少症组和非肌少症组的1周期、2周期顺铂总剂量行统计学分析，结果显示肌少症组1周期、2周期顺铂总剂量分别为143.25（四分位数12.75）mg、142.50（四分位数14.75）mg和非肌少症组144.75（四分位数9.75）mg、143.00（四分位数10.13）mg，差异无统计学意义（Z=-1.140、-0.981, P=0.254、0.327）。
根据CTCAE5.0版评价血液系统AAR（0~4级）[9]，美国RTOG急性放射损伤分级标准评价急性放射性肺炎（0~4级）、急性放射性食管炎（0~4级）[10]。
1.4 随访
通过查询电子病历或电话回访患者（或家属）或定期门诊复查，随访至食管癌进展或患者死亡或截止日期，以月作为随访单位，记录患者发生急性不良反应情况及生存情况。
1.5 统计学方法
数据分析采用SPSS25.0及Graph Pad Prism8.0.1软件包。Fisher' s精确检验或χ2检验分析数据在肌少症组和非肌少症组间的差异。S-W检验对连续性数据行正态分布检验，再用独立样本t检验分析符合正态分布数据（x±s）及非参数检验分析不符合正态分布数据（中位数（四分位数））在两组间的差异。单因素分析筛选出与≥3级AAR有统计学意义的变量，Logistic回归模型进一步分析其影响因素。Kaplan-Meier法计算生存率及Log rank检验比较两组间生存率的差异。α=0.05（双尾）为检验水准。
2 结果
2.1 食管鳞状细胞癌患者临床基本情况及身体参数分布
132例进展期ESCC患者（Ⅲ期35例、ⅣA期59例、ⅣB期38例）纳入本研究中，男93例、女39例，中位年龄64（四分位数6）岁，同步放化疗前65.9%（87/132）患者存在肌少症，中位年龄64（四分位数8）岁，34.1%（45/132）患者无肌少症，中位年龄64（四分位数9）岁；颈段及胸上段34例、胸中段51例、胸下段22例、食管胃交界处癌25例。FFMI与BSA呈中度相关（r=0.593, P < 0.001），见图 1。与非肌少症组相比，肌少症组SMI、BMI、FMI、FFMI和骨骼肌密度较低（P < 0.001、0.036、 < 0.001、0.001、0.026）；但治疗前ECOG-PS、血清白蛋白、中性粒细胞淋巴细胞比值、肿瘤位置及临床分期在两组间比较差异均无统计学意义，见表 1。
![]()
图 1 同步放化疗前进展期ESCC患者体表面积和无脂骨骼肌量的相关性Figure 1 Relationship between body surface area and fat free mass in advanced ESCC patients before concurrent chemoradiotherapy表 1 进展期食管鳞癌患者的基本情况Table 1 Demographics of patients with advanced ESCC
2.2 食管鳞状细胞癌同步放化疗期间急性不良反应发生、影响因素及治疗完成情况
132例进展期ESCC中，发生≥3级血液系统AAR为14例，≥3级放射性食管炎7例，≥3级放射性肺炎9例，4例同时发生≥3级血液系统AAR、放射性食管炎，2例同时发生≥3级血液系统AAR、放射性肺炎，1例同时发生≥3级放射性食管炎、放射性肺炎，最终23例发生≥3级总AAR，见表 2；与非肌少症组相比，肌少症组总AAR、血液系统AAR发生率高（P=0.045、0.034），见表 1。
表 2 进展期食管鳞状细胞癌同步放化疗急性不良反应情况Table 2 Acute adverse reactions in patients with advanced ESCC who received concurrent chemoradiotherapy
单因素、多因素分析显示SMI、肌肉减少症、脂肪指数、骨骼肌密度、骨骼肌总面积、无脂体指数、放疗剂量是发生≥3级AAR的影响因素，见表 3。32例患者化疗减量或暂停治疗，其中20例因AAR严重而致治疗依从性下降，8例因家庭经济原因而放弃继续治疗，4例未说明原因而放弃治疗；肌少症组的治疗依从性低于非肌少症组（P=0.035），见表 1。
表 3 进展期食管鳞癌同步放化疗≥3级急性不良反应影响单、多因素分析Table 3 Univariate and multivariate analyses of influencing factors of grade ≥3 AAR in patients with advanced ESCC who received concurrent chemoradiotherapy
2.3 食管鳞状细胞癌患者的生存结果
从2018年8月随访至患者死亡或至2022年7月，9例患者失访，失访率为6.82%，随访时间15.68（12.46）月。肌少症组生存率为22.98%（20/87）低于非肌少症组40.00%（18/45）（χ2=4.187, P=0.041）。肌少症组中位生存期[16.01（95%CI: 14.89~17.13）月]低于无肌少症组[19.27（95%CI: 14.45~24.09）月]（χ2=5.326, P=0.021），见图 2A。发生≥3级AAR的中位生存期[14.86（95%CI: 11.30~18.42）月]低于0~2级AAR[16.67（95%CI: 14.91~18.43）月]（χ2=5.470, P=0.019），见图 2B。在发生≥3级AAR患者中行分层分析发现，肌少症组中位生存期[12.13（95%CI: 10.15~14.11）月]低于无肌少症组[18.69（95%CI: 12.85~21.88）月]（χ2=4.466, P=0.035），见图 2C。
![]()
图 2 132例进展期食管鳞状细胞癌的生存分析曲线Figure 2 Survival curves of 132 patients with advanced ESCCA: survival curves of patients with advanced ESCC with or without sarcopenia before concurrent chemoradiotherapy; B: survival curves of patients with advanced ESCC with grade≥3 or 1-2 AAR of concurrent chemoradiotherapy; C: survival curves of advanced ESCC patients with grade≥3 grade AAR and sarcopenia or non-sarcopenia.3 讨论
本研究结果显示，肌少症患者身体成分变化（骨骼肌密度减低、骨骼肌总面积减少、脂肪量增多）与发生≥3级AAR的风险相关。进展期ESCC患者BMI均≥18.5 kg/m2，他们面临的风险与BMI < 18.5 kg/m2的患者不同，因为他们可能已经存在骨骼肌消耗，但是往往又被正常或较大的体质量和脂肪组织所掩盖。目前临床实际工作中根据患者体表面积确定化疗药物剂量，这部分患者被注射的化疗药物剂量相对增加，因为在相同身高和体质量的患者中，其体表面积相等，注射的化疗药物相等，但是5-Fu和铂类化疗药（包括顺铂、奥沙利铂和卡铂）都是亲水药物，分布到脂肪体组织（主要为骨骼肌组织）中并进行分解代谢[5]。肌少症患者的骨骼肌量减少，导致单位体积骨骼肌内的化疗药物剂量增高，发生≥3级AAR的风险（主要为血液系统不良反应）可能会增加，肥胖型肌少症患者发生风险可能会更高。因此定量评估身体组成成分（尤其去脂肪骨骼肌量）可作为指导进展期ESCC患者个性化化疗药物剂量的补充因素，尤其肥胖型肌少症患者。
进展期ESCC患者放化疗前常规采用胸腹部CT检查评估肿瘤临床分期，本研究采用CT图像额外定量评估身体成分的变化具有高度客观性和可重复性，而且不增加患者辐射剂量及经济负担。如在L3双侧横突层面CT图像上以-190 HU~-30 HU为阈值测量肌肉间脂肪是评估肌肉脂肪变性的一种无创测量方法，与肌肉活检获得的肌肉内脂质含量相关性较好[11]；肌肉CT值与肌肉密度具有良好相关性，肌肉密度越低反映肌肉内脂肪浸润越多[12]；肌肉密度减低与肿瘤预后不良和生存率减低有关[13]。本组结果显示骨骼肌量减少、骨骼肌密度减低、脂肪增多是发生≥3级AAR的危险因素，肌少症和AAR同时存在的患者有生存期缩短的风险，与Ganju等[14]研究头颈部癌合并肌少症的结果相仿，发现37%头颈部癌合并肌少症接受放化疗后发生 > 1种AAR，以急性血液系统不良反应为著，45%的肌少症患者有化疗延迟、剂量减少或治疗中断，进一步导致生存期缩短。CT定量评估患者身体成分（骨骼肌密度、骨骼肌总面积、脂肪量）可成为临床营养护理过程的一部分，有利于及时发现肌少症患者，采取早期营养和体育运动等个体化的干预方案，遵守改良的运动计划有助于减轻骨骼肌消耗，有助于降低发生≥3级AAR的风险[5]。
本研究存在一定的局限性：因本研究采用回顾性设计，缺乏营养支持、体育锻炼和患者生活质量的信息，可能影响肌少症与≥3级AAR的关系；因本研究中≥3级的血液系统不良反应、放射性肺炎、放射性食管炎的患者数量较少，对其危险因素未单独进行统计学分析。此外，由于各种原因导致的食欲下降可能与≥3级AAR相互作用，未来研究需把治疗期间的食物摄入量、身体活动考虑在内。
综上所述，CT可额外定量评估人体身体组成成分，发现肌少症相关的身体成分（骨骼肌量总面积的减少、骨骼肌密度减低、脂肪增多）与发生≥3级急性不良反应风险相关，把其考虑到化疗药物给药剂量中，可降低进展期ESCC患者同步放化疗的急性不良反应的发生率、改善其预后。
Competing interests: The authors declare that they have no competing interests.作者贡献：谢转红：实验设计与实施、数据采集、统计分析及解释、文章撰写许云鹏：实验设计与实施、数据采集马珲敏：实验设计王祥：实验设计、经费支持、文章修订和审校 -
![]()
图 1 三种Tspan8敲除质粒的序列比对图及测序峰图
Figure 1 Sequence alignment and sequencing peaks of three Tspan8 knockout plasmids
![]()
图 2 Western blot法检测慢病毒感染结肠癌SW480细胞后Tspan8的表达
Figure 2 Western blot was used to detect Tspan8 expression in colon cancer SW480 cells infected with lentivirus
![]()
图 3 不同浓度和不同时间安罗替尼作用后对结肠癌SW480细胞抑制率
Figure 3 Inhibitory rate of colon cancer SW480 cells treated with different anlotinib concentrations at different times
![]()
图 4 各组结肠癌SW480细胞的生长曲线
Figure 4 Growth curves of colon cancer SW480 cells in each group
![]()
图 7 各组Transwell小室迁移结果
Figure 7 Results of Transwell compartment migration in each group
![]()
图 8 各组Transwell小室侵袭结果
Figure 8 Results of Transwell compartment invasion in each group
![]()
图 10 Western blot法检测对照组和安罗替尼组SW480细胞中Tspan8的表达水平
Figure 10 Western blot was used to detect the expression of Tspan8 in SW480 cells of control group and anlotinib group
-
[1] SungH, Ferlay J, Siegel RL, et al. Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN Estimates of Incidence and Mortality Worldwide for 36 Cancers in 185 Countries[J]. CA Cancer J Clin, 2021, 71(3): 209-249. doi: 10.3322/caac.21660
[2] Lin B, Song X, Yang D, et al. Anlotinib inhibits angiogenesis via suppressing the activation of VEGFR2, PDGFRβ and FGFR1[J]. Gene, 2018, 654: 77-86. doi: 10.1016/j.gene.2018.02.026
[3] XieC, Wan X, Quan H, et al. Preclinical characterization of anlotinib, a highly potent and selective vascular endothelial growth factor receptor-2 inhibitor[J]. Cancer Sci, 2018, 109(4): 1207-1219. doi: 10.1111/cas.13536
[4] Sun Y, NiuW, Du F, et al. Safety, pharmacokinetics, and antitumor properties of anlotinib, an oral multi-target tyrosine kinase inhibitor, in patients with advanced refractory solid tumors[J]. J Hematol Oncol, 2016, 9(1): 105. doi: 10.1186/s13045-016-0332-8
[5] Zhou M, Chen XY, Zhang H, et al. China National Medical Products Administration approval summary: anlotinib for the treatment of advanced non-small cell lung cancer after two lines of chemotherapy[J]. Cancer Commun(Lond), 2019, 39(1): 36.
[6] Han B, Li K, Wang Q, et al. Effect of Anlotinib as a Third-Line or Further Treatment on Overall Survival of Patients With Advanced Non-Small Cell Lung Cancer The ALTER 0303 Phase 3 Randomized Clinical Trial[J]. JAMA Oncol, 2018, 4(11): 1569-1575. doi: 10.1001/jamaoncol.2018.3039
[7] Cheng Y, Wang Q, Li K, et al. Anlotinib as Third-Line or Further-Line Treatment in Relapsed SCLC: A Multicenter, Randomized, Double-Blind Phase 2 Trial[J]. J Thorac Oncol, 2018(13: 10S), S351-S352.
[8] Chi Y, Fang Z, Hong X, et al. Safety and efficacy of anlotinib a multikinase angiogenesis inhibitor, in patients with refractory metastatic soft tissue sarcoma[J]. Clin Cancer Res, 2018, 24(21): 5233-5238. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-17-3766
[9] 李娜, 黄琦, 张明军, 等. 安罗替尼三线治疗晚期转移性结直肠癌疗效分析[J]. 中华医学杂志, 2019, 99(36): 2844-2847. doi: 10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2019.36.010 Li N, Huang Q, Zhang MJ, et al. Efficacy and safety of Anlotinib as a third-line chemotherapy for metastatic colorectal cancer[J]. Zhonghua Yi Xue Za Zhi, 2019, 99(36): 2844-2847. doi: 10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2019.36.010
[10] Chi Y, Shu Y, Ba Y, et al. Anlotinib monotherapy for refractory metastatic colorectal cancer: a double-blinded, placebo controlled, randomized phase Ⅲ trial (alter0703)[J]. Oncologist, 2021, 26(10): e1693-e1703. doi: 10.1002/onco.13857
[11] Cheng Y, Du FC, Fang FQ, et al. Third-line treatment for metastatic colorectal cancer: anlotinib is superior to chemotherapy and similar to fruquintinib or regorafenib[J]. Neoplasma, 2020, 67(6): 1384-1390.
[12] Zhan ZY, Zhong LX, Feng M, et al. A Positive Tetraspanin 8 (TSPAN8)/β-Catenin Regulatory Loop Enhances the Stemness of Colorectal Cancer Cells[J]. Med Sci Monit, 2019, 25: 9594-9601. doi: 10.12659/MSM.919749
[13] Greco C, Bralet MP, Ailane N, et al. E-cadherin/p120-catenin and tetraspanin Co-029 cooperate for cell motility control in human colon carcinoma[J]. Cancer Res, 2010, 70(19): 7674-7683. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-09-4482
[14] Zhu Y, Ailane N, Sala-Valdés M, et al. Multi-factorial modulation of colorectal carcinoma cells motility-partial coordination by the tetraspanin Co-029/tspan8[J]. Oncotarget, 2017, 8(16): 27454-27470. doi: 10.18632/oncotarget.16247
[15] Guo QS, Xia B, Zhang F, et al. Tetraspanin CO-029 inhibits colorectal cancer cell movement by deregulating cell-matrix and cell-cell adhesions[J]. PLoS One, 2012, 7(6): e38464. doi: 10.1371/journal.pone.0038464
[16] Zhang HS, Liu HY, Zhou Z, et al. TSPAN8 promotes colorectal cancer cell growth and migration in LSD1-dependent manner[J]. Life Sci, 2020, 241: 117114. doi: 10.1016/j.lfs.2019.117114
[17] 中华人民共和国国家卫生健康委员会. 中国结直肠癌诊疗规范(2020版)[J]. 中华消化外科杂志, 2020, 19(6): 563-588. doi: 10.3760/cma.j.cn115610-20200504-00348 National Health Commission of the People's Republic of China. Chinese protocol of diagnosis and treatment of colorectal cancer (2020 edition)[J]. Zhonghua Xiao Hua Wai Ke Za Zhi, 2020, 19(6): 563-588. doi: 10.3760/cma.j.cn115610-20200504-00348
[18] 中国临床肿瘤学会指南工作委员会. CSCO结直肠癌诊疗指南2020版[M]. 北京: 人民卫生出版社, 2020: 131. Chinese Society of Clinical Oncology Guidelines Working Committee. Guidelines ofChinese society of clinical oncology(CSCO)—Colorectal cancer[M]. Beijing: People's Medical Publishing House, 2020: 131.
[19] Lan WL, Zhao JY, Chen WJ, et al. Anlotinib overcomes multiple drug resistant of the colorectal cancer cells via inactivating PI3K/AKT pathway[J]. Anticancer Agents Med Chem, 2021, 21(15): 1987-1995. doi: 10.2174/1871520621666210112113852
[20] Yang Q, Ni LC, Saber Imani, et al. Anlotinib Suppresses Colorectal Cancer Proliferation and Angiogenesis via Inhibition of AKT/ERK Signaling Cascade[J]. Cancer Manag Res, 2020, 12: 4937-4948. doi: 10.2147/CMAR.S252181
[21] Yan LH, Zhang D, Mo SS, et al. Anlotinib suppresses metastasis and multidrug resistance via dual blockade of MET/ABCB1 in colorectal carcinoma cells[J]. J Cancer, 2021, 12(7): 2092-2104. doi: 10.7150/jca.45618
[22] Jia ZX, Zhang Z, Li Z, et al. Anlotinib inhibits the progress of colorectal cancer cells by antagonizing VEGFR/JAK2/STAT3 axis[J]. Eur Rev Med Pharmacol Sci, 2021, 25(5): 2331-2343.
[23] Wei L, Li Y, Suo Z. TSPAN8 promotes gastric cancer growth and metastasis via ERK MAPK pathway[J]. Int J Clin Exp Med, 2015, 8(6): 8599-8607.
[24] 高辉, 殷玉敬, 巴雅尔, 等. TSPAN8对肺癌A549细胞体外增殖的影响及机制[J]. 现代肿瘤医学, 2017, 25(6): 864-867. doi: 10.3969/j.issn.1672-4992.2017.06.007 Gao H, Yin YJ, Bayaer, et al. The effect of TSPAN8 on cell proliferation of human lung cancer A549 cells and the mechanisms[J]. Xian Dai Zhong Liu Yi Xue, 2017, 23(6): 864-867. doi: 10.3969/j.issn.1672-4992.2017.06.007
[25] Lv L, Mei F, Wang J. Tetraspanin 8 promotes radioresistance of human nasopharyngeal carcinoma via the activation of PI3K/AKT pathway[J]. Int J Clin Exp Med, 2016, 9(7): 12543-12552.
[26] Li L, Yang DP, Cui DJ, et al. Quantitative proteomics analysis of the role of tetraspanin-8 in the drug resistance of gastric cancer[J]. Int J Oncol, 2018, 52(2): 473-484.
[27] Lin X, Bi Z, Hu Q, et al. TSPAN8 serves as a prognostic marker involving Akt/MAPK pathway in nasopharyngeal carcinoma[J]. Ann Transl Med, 2019, 7(18): 470. doi: 10.21037/atm.2019.08.02
[28] Akiel MA, Santhekadur PK, Mendoza RG, et al. Tetraspanin 8 mediates AEG-1-induced invasion and metastasis in hepatocellular carcinoma cells[J]. FEBS Lett, 2016, 590(16): 2700-2708. doi: 10.1002/1873-3468.12268
下载:
计量
- 文章访问数: 1394
- HTML全文浏览量: 408
- PDF下载量: 262
